熒光染料的優(yōu)點:
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便;
可以與任何PCR產(chǎn)物結合;
價格便宜;
熒光染料的缺點:
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Salmonella heidelberg |
貨號 | YSP97160 |
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熒光探針:
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點:
熒光背景低;
敏感性高;
雜交穩(wěn)定性高;
熒光光譜分辨率好;
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點:
成本高;
設計難度大;
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理:
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。
蓋膜蛋白β(TECTβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 白僵菌 1g
窖蛋白2(CAV2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 普通變形桿菌 250mg
窖蛋白3(CAV3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種 1g
鈣蛋白酶3(CAPN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 墳墓節(jié)桿菌 5g
鈣蛋白酶5(CAPN5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥99% 水生黃桿菌 10MG
鈣蛋白酶9(CAPN9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 費氏中華根瘤菌 25g
鈣蛋白酶10(CAPN10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 長雙歧桿菌 5g
組織蛋白酶H(CTSH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 75 wt. % in H2O,含 600 ppm MEHQ 阻聚劑 串珠鐮孢 100g
組織蛋白酶F(CTSF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 75 wt. % in H2O,含 600 ppm MEHQ 阻聚劑 黃海鞘氨醇盒菌 500g
組織蛋白酶W(CTSW)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 枯草芽胞桿菌枯草亞種 100g
組織蛋白酶V(CTSV)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 針葉樹散斑殼 25g
補體成分6(C6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 醬油曲霉 5g
谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 露濕漆斑菌 100g
水通道蛋白7(AQP7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 節(jié)桿菌 25g
蘭尼定受體3(RYR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽胞桿菌 500g
三合蛋白(TRDN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 1g
突觸融合蛋白3(STX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98%,順反異構體混合物 朱紅叢赤殼 1g
免疫球蛋白κ(Igκ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 長雙歧桿菌 1g
海德堡沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒內(nèi)皮素轉化酶1抗體NADPH peptide 還原型輔酶Ⅱ抗原100 ul
細胞外基質(zhì)蛋白1抗體proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide) 促尿鈉排泄肽前體C抗原100 ul
外胚層發(fā)育不良抗體NPY2R(Neuropeptide Y Receptor Type 2) 神經(jīng)肽Y受體2(多肽)20 ul
E2 tag標簽抗體NPY1R (neuropeptide Y1 receptor) 神經(jīng)肽Y1受體抗原500 ul
鐵螯合酶抗體NQO1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase l) 醌氧化還原酶抗原100 ul
DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprta receptor 1) 谷氨酸受體1(多肽)100 ul
酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體NR1/NMDAR1/GLUR1(N-Methyl-d-Asprta receptor 1) 谷氨酸受體1抗原20 ul
上皮細胞粘附分子抗體NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprta receptor 1) 谷氨酸受體1抗原100µg
酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprta receptor 2C) 谷氨酸受體2C(多肽)20 ug
PCR技術的定量原理:
擴增曲線
在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。