焦深是指能清晰成象的樣本層深度,即是指在用顯微鏡觀察好拍攝樣本表面時,從對準焦點的位置開始,改變物鏡與樣本表面的距離時,對焦能夠保持清晰的范圍。肉眼的調整能力因人而異,所以焦深也會出現因人而異的情況。現在常用的是與試驗結果比較一致的Berek公式。
焦深公式
肉眼觀察(Berek公式)
±D.O.F.=ω×250,000/(N.A.xM)+λ[2(N.A.)2](μm)
D.O.F.:焦深
ω:肉眼分辨率0.0014(當光學角度為0.5°時)
M:總倍率(物鏡倍率x目鏡倍率)
±D.O.F.=350/(N.A.xM)+0.275/2(N.A.)2(λ=0.55μm)
這表明數值孔徑越大,焦深越小。
例
MPLFLN為100倍(N.A.=0.90)時,WHN為10倍時
±D.O.F.=350/(0.90x1,000)+0.275/0.81=0.39+0.35
=0.73μm
視頻攝像機
視頻攝像機因CDD(電荷耦合電器)的像素數,光學倍率和數值孔徑不同,焦深各異。上述公式僅為粗略指南。
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